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昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSTs)ELISA試劑盒檢測(cè)范圍:

更新時(shí)間:2017-03-18      瀏覽次數(shù):1853

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)體液、腔液、組織勻漿及相關(guān)液體樣本昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTs)的活性。

有效期:6個(gè)月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

 

 

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTs)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTs)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
樣本處理及要求

1.  血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4過(guò)一夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標(biāo)儀(450nm)
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水

 

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

8孔×12

8孔×6

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

無(wú)

樣本稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2張

2張

無(wú)

說(shuō)明書

1份

1份

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:480、240、120、60、30、0 mIU/L

2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng)

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  • 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
  • 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
  • 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

 

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  3.   樣本孔待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品濃度

 

試劑盒性能

  •  檢測(cè)范圍15 mIU/L  480 mIU/L。
  •  靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于1.0 mIU/L
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
  •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

 

說(shuō)明

  • 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
  • zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
  • 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,電子版說(shuō)明書僅作參考。
  • 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到*的檢測(cè)結(jié)果。

    本試劑盒用于體外定量檢測(cè)體液、腔液、組織勻漿及相關(guān)液體樣本昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTs)的活性。

    有效期:6個(gè)月

    保存條件:2-8℃

    本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

     

     

     

    實(shí)驗(yàn)原理

    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTs)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的昆蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GSTs)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
    樣本處理及要求

    1.  血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

    4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

     

    需要而未提供的試劑和器材

  • 酶標(biāo)儀(450nm)
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱
  • 蒸餾水或去離子水
  •  

    試劑盒組成

    名稱

    96孔配置

    48孔配置

    備注

    微孔酶標(biāo)板

    8孔×12

    8孔×6

    無(wú)

    標(biāo)準(zhǔn)品

    0.3mL*6管

    0.3mL*6管

    無(wú)

    樣本稀釋液

    6mL

    3mL

    無(wú)

    檢測(cè)抗體-HRP

    10mL

    5mL

    無(wú)

    20×洗滌緩沖液

    25mL

    15mL

    按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋

    底物A

    6mL

    3mL

    無(wú)

    底物B

    6mL

    3mL

    無(wú)

    終止液

    6mL

    3mL

    無(wú)

    封板膜

    2張

    2張

    無(wú)

    說(shuō)明書

    1份

    1份

    無(wú)

    自封袋

    1個(gè)

    1個(gè)

    無(wú)

    1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:480、240、120、60、30、0 mIU/L

    2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

     

    注意事項(xiàng)

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
  • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  • 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
  • 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
  • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
  • 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
  • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
  •  

    試劑準(zhǔn)備

    試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

     

    操作步驟

  •   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  •   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  •   樣本孔待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
  •   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  •   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  •   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  •   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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    實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

    所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品濃度。

     

    試劑盒性能

  •  檢測(cè)范圍15 mIU/L  480 mIU/L
  •  靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于1.0 mIU/L。
  •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
  •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
  •  

    說(shuō)明

  • 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
  • zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
  • 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,電子版說(shuō)明書僅作參考。
  • 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到*的檢測(cè)結(jié)果。
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